非洲猪瘟病毒K205R基因检测方法研究

非洲猪瘟病毒K205R基因检测方法研究
作 者 : 郭少平
学位授予单位 : 内蒙古农业大学
学位名称 : 硕士
外文题名 : The Study on Detecting Methods of K205R Gene of African Swine Fever Virus
导师姓名 : 杨莲茹;吴绍强
学位年度 : 2010
关键词 : 非洲猪瘟病毒;K205R;实时荧光定量PCR;ELISA;检测
摘 要 : 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种急性、烈性传染病,目前尚无有效的疫苗及药物防治措施。 为满足对ASFV检测的需要,本研究在成功扩增出ASFV K205R基因的基础上,根据K205R基因序列设计合成引物及TaqMan探针,通过优化引物浓度、Mg2+浓度和退火温度,建立了检测ASFV的实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR qPCR),与OIE推荐的ASFV p72基因的荧光PCR检测方法进行比较分析,表明两种方法均具有很强的敏感性,在对重组质粒和模拟样品进行扩增时,可分别检测到101和102个拷贝的DNA分子,且特异性较高,但本研究所建立的方法在检测模拟样品时的扩增效率要优于OIE推荐的方法(99.8%/95%),可应用于相关动物及产品ASFV的检测。 将K205R基因与表达载体pQE30连接并转入大肠杆菌中,经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western Blot检测,结果显示,该基因编码的蛋白pK205R以可溶形式...

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