人胚胎干细胞抗肿瘤作用的体外初步研究

人胚胎干细胞抗肿瘤作用的体外初步研究
作 者 : 郑良栋
学位授予单位 : 重庆医科大学
学位名称 : 硕士
导师姓名 : 廖红
学位年度 : 2016
关键词 : 胚胎干细胞;共培养;上清液;肿瘤;凋亡
摘 要 : 目的1.研究体外共培养情况下人胚胎干细胞H9对肝癌Hep G2细胞的抑制作用。2.研究人胚胎干细胞H9与乳腺癌细胞共培养上清液对乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外抑制作用。方法1.建立人胚胎干细胞(H9)与肝癌HepG2细胞共培养体系,显微镜下观察胚胎干细胞对肿瘤细胞生物学行为的影响,流式细胞仪检测HepG2细胞对肿瘤细胞的凋亡与周期的影响。2.建立人胚胎干细胞(H9)与乳腺癌MDA-MB-231细胞接触式共培养体系,收集共培养上清液。以单独培养的H9细胞上清为对照,显微镜下观察共培养上清液对肿瘤细胞生物行为学的影响,用MTT法检测上清液对MDA-MB-231细胞增殖的影响,Hoechst染色及流式细胞术检测上清液对肿瘤细胞的凋亡影响;Transwell小室法检测上清液对肿瘤细胞侵袭和迁移的影响。结果1.共培养过程中,肝癌HepG2细胞生长受到抑制,随共培养时间延长,细胞数量逐渐减少,出现老化或凋亡迹象;流式细胞术检测发现HepG2细胞凋亡率显著增加,细胞周期被阻滞于G0/G1期。2.人胚胎干细胞(H9)与乳腺癌MDA-MB-231共培养上清液处理后的乳腺癌MDA-MB-231细胞形态学发生变化,出现凋亡迹象;Hoechst33258染色后荧光显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态学改变,表现为核缩小、核碎裂等;细胞凋亡率升高,细胞生存率和细胞侵袭、迁移能力均降低,而对照组MDA-MB-231细胞几乎没有受到影响。结论体外共培养情况下人胚胎干细胞H9对肝癌Hep G2细胞有一定抑制作用;人胚胎干细胞H9与人乳腺癌MDA-MB-231细胞共培养的上清液对MDA-MB-231有一定的体外抑癌效应。综上所述,人胚胎干细胞一定条件下在体外对肿瘤细胞有某种程度的抑制作用。

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