非洲猪瘟病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立

非洲猪瘟病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立
作 者 : 江彦增
学位授予单位 : 中国农业科学院
学位名称 : 硕士
外文题名 : The Development of Rapid Assay for African Swine Fever Virus by Loop Mediated Isothermal Amplification Method (LAMP)
导师姓名 : 朱鸿飞
学位年度 : 2008
关键词 : 非洲猪瘟;快速检测;引物设计;LAMP;P72基因
摘 要 : 非洲猪瘟(ASF)由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起,死亡率高达100%。由于该病毒特殊的免疫逃避机制,目前尚无有效治疗手段。虽然我国并无ASF疫情,但随着各种国际交往的增多,受到该病威胁的可能性也越来越大,建立一种高效灵敏,简便快捷的非洲猪瘟检测技术具有很重要的现实意义。环介导等温扩增法(LAMP)因其独特的设计被广泛应用于各种病原检测,目前国内外还没有关于非洲猪瘟LAMP检测方法的报道。因此本研究建立的ASFV-LAMP方法不但具有实际应用价值,也具有较高的科研意义。非洲猪瘟P72基因高度保守,是建立核酸快速检测方法的理想位点。本研究利用生物信息学手段选定了P72基因C端保守序列的一部分作为靶序列,通过PrimerExplorer3.0软件分析,依据GC含量,末端稳定性,二级结构等参数,设计筛选出了4套LAMP引物。由于LAMP的扩增产物片段大都在100到300bp,一旦出现非特异性扩增,则很难分辨。因此本研究为每个扩增产物设计了酶切位点用于后续的鉴定,以保证实验的可靠性。以LAMP保守参数进行的扩增结果表明,四套引物中4FIP,4BIP,4F3,4B3引物组扩增效率最佳,产物条带清晰明显,且酶切片...

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