非洲猪瘟病毒VP72基因表达与ELISA检测方法的建立

非洲猪瘟病毒VP72基因表达与ELISA检测方法的建立
作 者 : 仇华磊
学位授予单位 : 扬州大学
学位名称 : 硕士
外文题名 : Expression of ASF-VP72 and Establishment of ELISA Mediated Detecting Method to African Swine Fever
导师姓名 : 孙怀昌
学位年度 : 2006
关键词 : 非洲猪瘟;VP72;原核表达;基因免疫;ELISA
摘 要 : 非洲猪瘟(African Swine Fever, ASF)是由ASFV引起的猪的急性、烈性传染病,以全身出血、呼吸障碍和神经症状为主要特征,强毒株感染的发病率和死亡率可达100%,对养猪业危害巨大,是各国严密防范的传染病,也是世界猪病研究的重点。目前我国尚无本病的发生。但随着国际贸易和人员交往的日益频繁,该病传入我国的风险是存在的,因此建立快速诊断方法十分必要。 为了建立ASFV特异抗体检测方法,本研究根据国外发表的ASFV VP72基因序列设计引物,以英国动物健康研究所提供的含VP72基因的质粒为模板,扩增VP72基因及其可溶性抗原片断VP72S,将其插入pUC载体中进行测序,所获序列与已发表的ASFV-VP72(Ba71株)完全相同。将测序正确的VP72和VP72S基因克隆入pGEX-6p-1载体中GST基因的下游,重组大肠杆菌用IPTG诱导表达,并采用不同方法纯化得GST融合蛋白。将VP72基因克隆入真核表达pcDNA3中,重组载体用多聚乙酸亚胺包裹后基因免疫8周龄小鼠,用制备的血清对原核表达产物进行Western-blotting验证,结果表明,本实验原核表达的重组VP72是正确的...

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