广西地区犬细小病毒的分子流行病学调查研究

广西地区犬细小病毒的分子流行病学调查研究
作 者 : 黄华旭
学位授予单位 : 广西大学
学位名称 : 硕士
导师姓名 : 吴显实
学位年度 : 2018
关键词 : 犬细小病毒;VP2基因;PCR;序列分析;全基因
摘 要 : 为了解广西地区犬细小病毒病的流行病学情况,及时发现和掌握疫情动态,现将2015年1月1日至2017年12月31日期间,在广西地区的11861例犬传染性病毒病(以犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)、犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)为主)及其中7107例犬细小病毒病单一感染和犬细小病毒病混合感染的门诊记录情况进行调查分析。结果表明:犬细小病毒感染存在性别、年龄、品种、季节和免疫状况等方面的差异,其中公犬感染率高,2-3月龄幼犬感染率高,纯种犬发病率高,3-5月份犬发病率高,未免疫接种的犬感染率高。本实验建立了快速检测犬细小病毒的PCR方法,最低能检测出5-6×6.1342ng/μL的病毒DNA。随机采集2016~2017年来自广西地区的120只患病动物应用胶体金免疫层析法确诊为犬细小病毒的临床病料,应用已建立的PCR检测方法对其进行二次检测,120只患病动物的病料均为阳性,检出率为100%。PCR方法检测CPV具有更高的灵敏性,而胶体金免疫层析法在临床操作上更加快捷简便。通过对广西不同地区的120份临床病料的CPV VP2全基因测序结果进行CPV亚型分析,发现CPV-2c亚型占59.17%(71/120),CPV--2亚型占25.83%(31/120),CPV-2b 亚型占 15.00%(18/120),表明 2016~2017年广西地区的CPV主要流行的亚型为CPV-2c和CPV-2a,而CPV-2b的比例较低,无CPV-2亚型,这也是广西地区首次发现CPV-2c;分离株之间以及与参考毒株之间的核苷酸序列、氨基酸序列的同源性都较高。通过对从PCR鉴定VP2全基因为阳性的120份样品(粪便)DNA随机挑选出10份样品进行CPV全基因测序,从测序结果可知全基因的核苷酸同源性较高,但氨基酸同源性有高有低,而VP2的核苷酸及氨基酸的同源性都较高,再结合临床症状观察可知,这10个样品所对应的病犬的临床症状都符合犬细小病毒病的临床症状,所以CPV起抗原决定簇作用的部位在VP2片段上,与报道相符合。综上所述,广西地区犬细小病毒病的分子流行病学调查及遗传差异分析,为探讨临床免疫失败的原因及有针对性地开发宠物用CPV疫苗奠定了理论基础。

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