饲料中氨基酸的HPLC检测方法研究
作 者 : 尤晓蒙
学位授予单位 : 河北农业大学
学位名称 : 硕士
导师姓名 : 锁然
学位年度 : 2015
关键词 : 饲料；氨基酸；高效液相色谱；检测方法
摘 要 : 饲料中的氨基酸是畜禽的重要营养物质,动物对蛋白质的需求实际上是对氨基酸的需求。饲料中含有的氨基酸种类和含量是判定饲料质量高低的重要指标。因此,饲料中氨基酸的准确分析、测定十分重要。但氨基酸分析误差较大,可能是由于不同的水解条件和不同的分析方法所造成的。氨基酸的分析测定是一个复杂的过程,所以需要建立一套完善的饲料中氨基酸的检测方法。蛋白质的氨基酸分析分成三大步骤,第一,把蛋白质彻底的水解为游离的氨基酸混合物;第二,用色谱的方法把混合的氨基酸分离成单个的氨基酸;第三,测定每个氨基酸的含量。目前,采用常规的酸水解法测定蛋白质氨基酸的含量,因为色氨酸在酸水解过程中几乎都被破坏,无法与其他的氨基酸一起测定,所以只能单独测定。本研究分为两大部分,一部分是柱前衍生高效液相色谱法测定饲料中的氨基酸;另一部分是高效液相色谱法测定饲料中的色氨酸。具体内容如下:本试验建立了以2,4-二硝基氯苯为柱前衍生剂的高效液相色谱法测定饲料中的氨基酸。通过对前处理条件中酸解剂、酸样比、盐酸浓度、水解温度、水解时间、通氮气、微波水解时间、微波水解温度、微波水解与常规水解的比较,衍生条件中衍生剂用量、衍生反应时间、衍生反应温度、衍生反应缓冲液、衍生反应缓冲液p H?色谱条件中色谱柱、缓冲液、缓冲液p H?缓冲液浓度、三乙胺加入量、洗脱程序、流速、色谱柱温度、有机洗脱溶剂、检测波长进行研宄,建立了19种氨基酸的标准曲线,其相关系数范围为0.9901?0.9993;检出限为0.69?5.70mg/L;加标回收率为91.9%?110.7%。结果表明,本方法操作简单,无干扰,具有较好的准确度和较高的灵敏度,能够满足饲料中氨基酸的定量分析。本试验还建立了高效液相色谱法测定饲料中的色氨酸。通过对前处理条件中碱解剂种类、碱解剂浓度、碱解剂用量、碱解时间、碱解温度、通氮气,色谱条件中缓冲液、流动相p H?有机洗脱溶剂、流动相组成、流动相流速、色谱柱温度、检测波长的研宄,建立了色氨酸的标准曲线,其相关系数为0.9998;检出限为O.llmg/L;加标回收率为93.5%。结果表明,本方法操作简单,无干扰,具有较好的准确度和较高的灵敏度,能够满足饲料中氨基酸的定量分析。
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下载参考地址：
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饲料中氨基酸的HPLC检测方法研究1(1).pdf
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