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微生物学实验课程是微生物学理论课程的补充和深化 , 以实践环节为主, 围绕技术 综合和创新 三个要素设计课程内容 , 由附属于理论课的直观验证为主向着相对独立并以技术和技能为主 具有逐渐完善的学生考核体系的实验技术方向发展 , 同时注重对学生综合运用技术的能力和创新能力的培养

微生物学实验指导.PDF

微生物学实验指导书

1课程教学与实验教学计划学时比 48/48

2适用专业

生物工程与生物技术专业

3实验的目的与基本要求

微生物学实验课程是微生物学理论课程的补充和深化 , 以实践环节为主, 围绕技术  综合和创新三个要素设计课程内容 , 由附属于理论课的直观验证为主向着相对独立并以技术和技能为主 具有逐渐完善的学生考核体系的实验技术方向发展 , 同时注重对学生综合运用技术的能力和创新能力的培养 通过微生物学实验教学 , , 使学生掌握微生物学的 常规实验技术 , , 掌握规范的无菌操作技术要领 并在此基础上通过综合创新性实验设计的锻炼使学生达到对理论与各项实验技术的灵活运用 , 初步的培养学生思考问题和独立解决实际问题的能力

实验一 培养基的制备 

 

灭菌与消毒 1

‣ ‣. 备 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 1

( 一 ) 实验目的要求

1.明确培养基的配制原理⃞

2.通过对基础培养基的配制,掌握配制培养基的一般方法和步骤⃞

( 二 ) 基本原理

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基,由于这种培养

基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供作微生物生长繁殖之用⃞基础培养基含有牛肉

膏,蛋白胨和 NaCl⃞其中牛肉膏为微生物提供碳源能源磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素,

而NaCl提供无机盐

( 三 ) 实验设备

1.溶液或试剂 牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂,1 mol/L NaOH, 1 mol/L HCl⃞

2.仪器或其他用具 试管,三角瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,天平,牛角匙,高压蒸

气灭菌锅,pH 试纸(pH 5.5—9.0),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等⃞

( 四 ) 操作步骤

1.称量

按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏,蛋白胨NaCl 放人烧杯中.牛肉膏常用玻棒挑取,

放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒人烧杯.也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,

这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片.

蛋白胨很易吸湿 , 在称取时动作要迅速 . 另外 , 称药晶时严防药晶混杂 , 一把牛角匙用于一种

药晶 , 或称取一种药晶后 , 洗净 . 擦干 , 再称取另一药晶 . 瓶盖也不要盖错 .

2.溶化

在上述烧杯中先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解,或在

磁力搅拌器上加热溶解(图 V—1).将药品完全溶解后,补充水到所需的总体积,如果配制固体培养

基时,将称好的琼脂放人已溶的药品中,再加热溶化,最后补足所损失的水分.在制备用三角瓶盛

固体培养基时般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中,然后按 1.5%一 2.0%的量将琼脂

直接分别加入各三角瓶中,不必加热溶化,而是灭菌和加热溶化同步进行,节省时间.

在琼脂溶化过程中 , 应控制火力 , 以免培养基因沸腾而溢出容器 . 同时 , 需不断搅拌 , 以防琼

脂糊底烧焦 . 配制培养基时 , 不可用铜或铁锅加热溶化 , 以免离子进入培养基中 , 影响细菌生长 .

3

3.调 PH

在未调 pH 前,先用精密 pH 试纸测量培养基的原始 pH,如果偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入

1 mol/LNaOH 边加边搅拌,井随时用 pH 试纸测其 pH,直至 pH 达 7.6.反之,用 1mol/LHCL 进行调

节.

对于有些要求pH较精确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行(使用方法可参考有关说明书).

pH 不要调过头,以避免回调而影响培养基内各离子的浓度.配制 pH 低的琼脂培养基时,若预

先调好 pH 并在高压蒸气下灭菌,则琼脂因水解不能凝固.因此,应将培养基的成分和琼脂分开灭菌

后再混合,或在中性 pH 条件下灭菌,再调整 PH.

4.过滤

趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利某些实验结果的观察.一般无特殊要求的情况下,这一步可

以省去(本实验勿需过滤).

5.分装

按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内.分装装置见图 V—2.

(1)液体分装 分装高度以试管高度的 1/4 左右为宜.分装三角瓶的量则根据需要而定,一般

以不超过三角瓶容积的一半为宜,如果是用于振荡培养用,则根据通气量的要求酌情减少;有的液

体培养基在灭菌后,需要补加一定量的其他无菌成分,如抗生素等,则装量一定要准确.

(2)固体分装 分装试管,其装量不超过管高的 1/5,灭菌后制成斜面.分装三角烧瓶的量以

不超过三角烧瓶容积的一半为宜.

(3)半固体分装 试管一般以试管高度的 1/3 为宜,灭菌后垂直待凝.

分装过程中,注意不要使培养基沾在管(瓶)口上,以免沾污棉塞而引起污染.

6.加塞

培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞及试管帽等),以阻止外

界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面).

7.包扎

加塞后,将全部试管用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞其

外再用一道麻绳扎好.用记号笔注明培养基名称组别配制日期.三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,

用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称组别配制日期.

(有条件的实验室,可用市售的铝箔代替牛皮纸,省去用绳扎,而且效果好.)

8.灭菌

将上述培养基以 0.103 MPa,121‡,20 nllrl 高压蒸气灭菌.

9.搁置斜面

将灭菌的试管培养基冷至 50左右(以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其他合适

高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜(图 V—3).

10.无菌检查

将灭菌培养基放人 37‡的温室中培养 24—48h,以检查灭菌是否彻底.

 

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